10. PARTE SPERIMENTALE


10.1. Materiali e metodi

L'indagine epidemiologica è stata condotta nel periodo tra aprile e luglio 2008 su un campione di 587 cani di proprietà, provenienti da 4 province (Mantova, Verona, Rovigo, Padova), situate nell'area della Pianura Padana, bacino idrografico del fiume Po, habitat ideale dei Culicidi vettori. I cani sono stati testati in due ambulatori veterinari, uno ad Ostiglia, in provincia di Mantova, e uno a Nogara, in provincia di Verona. Da ciascun soggetto è stato prelevato il sangue dalla vena cefalica per essere esaminato con un kit ELISA (SNAP® IDEXX), test diagnostico antigenico, semiquantitativo, che può essere effettuato su sangue intero, plasma o siero. Tre gocce di sangue sono state messe in una provetta con l'aggiunta di quattro gocce di reagente. La provetta è stata capovolta 3-5 volte e poi il contenuto è stato versato nel dispositivo di prova fornito nel kit. Il risultato compariva dopo 8 minuti circa: la comparsa di uno spot, di colore blu, alle ore 12 indicava la negatività nei confronti dell'infestazione; la comparsa di due spot colorati, uno alle ore 12 e uno alle ore 15, indicava la positività; la comparsa di tre spot, uno alle ore 12, uno alle ore 15 e uno alle ore 9, indicava un'elevata positività antigenica nei confronti della FCP.
Sono state compilate delle schede di identificazione per ogni cane testato, riportando la razza, l'età, il sesso, il colore del mantello, la località di provenienza, il tipo di profilassi effettuata e il risultato del test antigenico.
Il risultato del test è stato valutato statisticamente in relazione alle seguenti informazioni: sesso (maschio/femmina), razza (pura/meticcia), età, caratteristiche del mantello (presenza del colore nero e del colore bianco), zona di provenienza (provincia di Mantova, Verona, Rovigo, Padova) e modalità di profilassi effettuata (completa, assente, incompleta). Per incompleta si intende una profilassi non effettuata per tutto il periodo in cui sussistono le condizioni favorevoli allo sviluppo e alla sopravvivenza del vettore zanzara.
I dati (razza, sesso, età, mantello, risultato del test, profilassi) sono stati sintetizzati mediante statistiche descrittive, fissando un livello di confidenza del 95%, sia per quanto riguarda le frequenze (dati qualitativi), sia per le medie (dati quantitativi).
I dati qualitativi sono stati analizzati con il test statistico chi-quadrato (X2) per vedere la possibile relazione tra le variabili (razza, sesso, mantello, provenienza, profilassi) e la positività all'infestazione. Utilizzando lo stesso test è stata valutata la relazione anche tra le variabili sesso, razza, provincia con il tipo di profilassi effettuata (Armitage, 1971).
I dati quantitativi, quali quelli relativi all'età, sono stati analizzati con il test t di Student (Armitage, 1971), al fine di stabilire se esisteva una relazione tra l'età media dei soggetti e il risultato del test; tra l'età media e la profilassi effettuata.
Con lo scopo di valutare più variabili simultaneamente, è stata applicata una tecnica multivariata, l'analisi di regressione logistica, per studiare l'effetto dell'interazione tra le variabili indipendenti con il risultato del test antigenico, e quindi con la positività all'infestazione. Questo metodo permette di stabilire le correlazioni tra ciascuna variabile indipendente e quella dipendente, quando gli effetti delle altre variabili indipendenti sono stati rimossi (Dohoo et al., 2003).
Sono stati considerati significativi valori di p < 0,05 e di p < 0,01 sia per il test X2 , sia per il test t di Student, nonché per la regressione logistica.
La prevalenza e la distribuzione geografica della parassitosi nelle province esaminate è stata visualizzata nelle cartine 1 e 2.



10.2. Risultati

    10.2.1. Statistica descrittiva

Dalla statistica descrittiva è emerso che nel campione esaminato, costituito da 587 cani, il 41,74% è rappresentato dai cani di razza meticcia. Le razze presenti nel campione sono riportate nella tabella 3.
Per quanto riguarda il sesso i cani di sesso femminile (50,26%) sono in numero maggiore rispetto a quelli di sesso maschile (49,74%).
Se si prende in considerazione l'età dei soggetti questa presenta un range da 6 mesi a 20 anni, con una media di 5 anni.
Per ciò che concerne il colore del mantello è risultato che la presenza del colore nero (49,74% dei soggetti hanno un mantello nero o con presenza del nero) è maggiore rispetto al colore bianco (32,03% ha un mantello bianco o con presenza di bianco).
Dei 587 campioni di sangue esaminati, 39 (6,64%) sono risultati positivi al test antigenico. Il 93,36% (548 soggetti) dei campioni è invece risultato negativo.
Il 92,16% dei cani effettua una profilassi completa, il 4,09% una profilassi incompleta e la restante parte (3,75%) non effettua alcuna profilassi.
I risultati sono schematizzati, assieme all'intervallo di confidenza, nella tabella 4.


Tabella 3. Elenco delle razze testate

RAZZA
NUMERO
ALANO
4
BARBONE NANO
11
BASSETHOUND
2
BASSOTTO TEDESCO
4
BEAGLE
4
BOBTAIL
2
BORDER COLLIE
2
BOVARO DEL BERNESE
1
BOXER
28
BULDOG FRANCESE
2
BULDOG INGLESE
3
BULLMASTIFF
4
BRACCO TEDESCO
10
BRACCO UNGHERESE
11
CARLINO
2
COCKER SPANIEL
7
CORSO
1
CHIHUAHUA
2
CHOW CHOW
3
DALMATA
10
DOBERMANN
8
EPAGNEUL BRETON
8
FOX TERRIER
4
GOLDEN RETRIEVER
6
LABRADOR RETRIEVER
17
MALTESE
7
METICCI
245
PASTORE BELGA
5
PASTORE MAREMMANO
4
PASTORE TEDESCO
43
PASTORE SCOZZESE
3
PECHINESE
5
PINSCHER
6
POINTER INGLESE
9
ROTTWEILER
5
SAN BERNARDO
1
SCHNAUZER GIGANTE
3
SEGUGIO ITALIANO
15
SETTER
31
SIBERIAN HUSKY
1
SPINONE ITALIANO
7
SPITZ TEDESCO NANO
2
SHIBA
2
SHIH TZU
3
TERRANOVA
7
VOLPINO ITALIANO
4
YORKSHIRE TERRIER
19
WHITE TERRIER
4
TOTALE
587

 

Tabella 4. Statistiche descrittive.
Per l'età è riportata la media, per le altre variabili la frequenza.

Variabili
Totali
Media/
Frequenza%
Intervallo di confidenza 95%
Somma
Errore standard
Razza meticcia
587
41,74%
37,74
45,74
245
2,04
Sesso M
587
49,74%
45,69
53,80
292
2,06
Età
587
5,34 anni
5,05
5,62
3132,92
14,67
Bianco
587
32,03%
28,24
35,81
188
1,93
Nero
587
49,74%
45,69
53,80
292
2,06
Test Ag positivo
587
6,64%
4,62
8,66
39
1,03
Profilassi completa
587
92,16%
92,02
92,3
541
0,07
Profilassi incompleta
587
4,09%
3,99
4,19
24
0,05
Profilassi assente
587
3,75%
3,65
3,85
22
0,05


      10.2.2. Risultati del test X2 e del test t di Student

Il test statistico chi-quadrato (X2), effettuato utilizzando come variabili il test antigenico e la razza, ha evidenziato una differenza statisticamente significativa (p < 0,01). Si è riscontrata una percentuale (10,20%) di positività all'infestazione maggiore nei cani di razza meticcia rispetto a quelli di razza pura (4,09%). I risultati sono schematizzati nella tabella 5.


Tabella 5. Tabella di contingenza Test Antigenico x Razza.
Test X2 : p < 0,01.

Razza
Totali
Pura
Meticcia
 
Test Ag
Negativo
328
220
548
Positivo
14
25
39
Totale
 
342
245
587
% Positivi
  
4,09%
10,20%
6,64%

I risultati del test X2, utilizzando come variabili il test antigenico e il sesso non hanno mostrato differenze statisticamente significative (p > 0,05). La percentuale di positività all'infestazione riscontrata nei maschi (7,53%) è apparentemente maggiore rispetto a quella delle femmine (5,76%), tuttavia il dato non suffragato dalla significatività statistica può essere attribuito al caso. I risultati sono schematizzati nella tabella 6.


Tabella 6. Tabella di contingenza Test Antigenico x Sesso.
Test X2 : p > 0,05.

Femmine
Maschi
Totali
Test Ag
Negativo
278

270

548
Positivo
17
22
39
Totali
 
295
292
587
% Positivi
 
5,76%
7,53%
6,64%



Utilizzando il medesimo test ed includendovi le variabili test antigenico e colore del mantello (presenza del colore nero o bianco) non si sono osservate differenze statisticamente significative (p > 0,05). I risultati sono schematizzati nelle tabelle 7 e 8.


Tabella 7. Tabella di contingenza Test Antigenico x Colore nero.
Test X2 : p > 0,05.

Colore nero
Totali
Assente
Presente
 
Test Ag
Negativo
279
269
548
Positivo
16
23
39
Totali
 
295
292
587
% Positivi
 
5,42%
7,88%
6,64%



Tabella 8. Tabella di contingenza Test Antigenico x Colore bianco.
Test X2 : p > 0,05.

Colore bianco
Totali
Assente
Presente
 
Test Ag
Negativo
373
175
548
Positivo
26
13
39
Totali
 
399
188
587
% Positivi
 
6,52%
6,91%
6,64%

La relazione fra il risultato del test antigenico e le quattro province considerate (Mantova, Verona, Rovigo, Padova) non ha evidenziato differenze statisticamente significative (p > 0,05). I risultati del test devono essere valutati con cautela in quanto non tutti i valori attesi erano > di 5 e questo sarebbe un prerequisito per effettuare il test. Per questo motivo, utilizzando sempre un test X2, sono state prese in considerazione come variabili il test antigenico e le province che avevano il maggior numero di campioni esaminati (Mantova e Verona). Anche in questo caso le prevalenze riscontrate sono risultate omogenee (p > 0,05). I risultati sono riportati nelle tabelle 9 e 10.


Tabella 9. Tabella di contingenza Test Antigenico x Province.
Test X2 p > 0,05.

Province
Totali
VR
MN
PD
RO
 
Test Ag
Positivo
197
312
2
37
548
Negativo
15
22
0
2
39
Totali
  
212
334
2
39
587
% Positivo
  
7,07%
6,58%
0%
5,12%
6,64%



Tabella 10. Tabella di contingenza Test Antigenico x Province MN e VR.
Test X2 : p > 0,05.

Province
Totali
MN
VR
 
Test Ag
Negativo
312
197
509
Positivo
22
15
37
Totali
  
334
212
546
% Positivi
  
6,58%
7,07%
 




Mettendo in relazione il risultato del test antigenico con il tipo di profilassi (completa, incompleta, assente), è emersa una differenza statisticamente significativa (p < 0,01). Il 93,36% dei soggetti esaminati è risultato negativo al test, di questi il 92,16% sono soggetti che effettuano una profilassi completa mentre l'1,19% sono soggetti che non hanno effettuano una profilassi o che l'hanno effettuata ma in modo incompleto.
La positività all'infestazione (39 soggetti corrispondenti al 6,64%) è stata riscontrata solo nei cani che non hanno effettuato una profilassi o in quelli che hanno effettuato una profilassi incompleta. I risultati sono schematizzati nella tabella 11.


Tabella 11. Tabella di contingenza Test Antigenico x Profilassi.
Test X2 : p < 0,01.

Profilassi
Totali
Assente
Incompleta
Completa
Test Ag
Negativo
2
5
541
548
Positivo
20
19
0
39
Totali
  
22
24
541
587
% Positivi
  
90,9%
79,17%
0%
6,64%



Utilizzando un test t di Student è stata comparata l'età media con l'esito del test antigenico e non sono state evidenziate differenze statisticamente significative (p > 0,05). I risultati sono schematizzati nella tabella 12.


Tabella 12. Test Antigenico x Età. Risultati del test t di Student: p > 0,05.

Età media
Valore t
P
Test Ag
Negativo
Positivo
Anni
5,26
6,36
-1,86
0,06

 

Prendendo in considerazione la profilassi, è stata valutata la possibile relazione con le variabili età, provincia, sesso, razza.
Utilizzando il test t di Student è stato comparato il tipo di profilassi effettuata con l'età media, ed è emersa una differenza statisticamente significativa (p < 0,05) tra soggetti che effettuano o meno la profilassi. Sembra che ci sia una tendenza a non effettuare una profilassi nei cani più vecchi rispetto a quelli più giovani. I risultati sono schematizzati nella tabella 13.


Tabella 13. Profilassi x Età. Risultati del test t di Student: p < 0,05.

Età media
Valore t
P
Profilassi
Assente
Completa
  
  
Anni
6,59
5,23
2,49
0,012




Il test X2 , utilizzando come variabili la profilassi e le province, non ha evidenziato differenze statisticamente significative (p > 0,05). Come detto in precedenza, i risultati devono essere valutati con cautela in quanto non tutti i valori attesi erano > di 5. Per questo motivo il test è poi stato applicato alle province di Mantova e Verona (con il maggior numero di campioni) e la profilassi, ma, ancora, non state rilevate differenze statisticamente significative (Tabelle 14 e 15).


Tabella 14. Tabella di contingenza Profilassi x Province.
Test X2 : p > 0,05.

Profilassi
Totali
Assente
Incompleta
Completa
  
Province
MN
12
16
306
334
PD
0
0
2
2
RO
2
0
37
39
VR
8
8
196
212
Totali
  
22
24
541
587



Tabella 15. Tabella di contingenza Profilassi x Province MN e VR.
Test X2 : p > 0,05.

Profilassi
Totali
Assente
Incompleta
Completa
Province
MN
12
16
306
334
VR
8
8
196
212
Totali
   
20
24
502
546


I risultati del test X2 , utilizzando come variabili il sesso e la profilassi, non hanno mostrato differenze statisticamente significative (p > 0,05). Anche se sembra che ci sia una tendenza a non effettuare una profilassi o a farla incompleta nei maschi (9,25% dei maschi) più che nelle femmine (6,44% delle femmine), il dato non confermato dalla significatività statistica deve essere interpretato come casuale (Tabella 16).


Tabella 16. Tabella di contingenza Profilassi x Sesso.
Test X2 : p > 0,05.

Profilassi
Totali

Assente

Incompleta
Completa
Sesso
Maschio
7
12

276

295
Femmina
15
12
265
292
Totali
   
22
24
541
587

 



Utilizzando lo stesso test X2 , con le variabili profilassi e razza, si sono riscontrate differenze statisticamente significative (p < 0,01), con una minor tendenza ad effettuare una profilassi completa nei cani di razza meticcia (217 soggetti corrispondenti al 88,57%) in modo inferiore rispetto ai cani di razza pura (324 corrispondenti al 94,74%). I risultati sono schematizzati nella tabella 17.


Tabella 17. Tabella di contingenza Profilassi x Razza.
Test X2 : p < 0,01.

Profilassi
Totali
Assente
Incompleta
Completa
Razza
Pura
6
12
324
342
Meticcia
16
12
217
245
Totali
   
22
24
541
587



    10.2.3. Analisi di regressione logistica

Avendo rilevato differenze statisticamente significative tra le variabili razza e test antigenico, test antigenico e profilassi, profilassi e razza, e tra età media e profilassi, è stato applicato un test di regressione logistica, utilizzando come variabili la profilassi, la razza e l'età.
Considerando contemporaneamente le variabili indipendenti è emerso che l'esito del test antigenico è legato alla sola variabile profilassi (p < 0,01).
I risultati dell'analisi di regressione logistica ha dato i risultati schematizzati nella tabella 18.



Tabella 18. Risultati dell'analisi di regressione logistica.

ß
Errore standard
p
Profilassi*
-10,376
1,811
0,000
Razza
17,333
2200,558
0,994
Anni*
-0,088
0,107
0,409
Profilassi-razza
-33,847
4401,115
0,994

(* variabile quantitativa)



Cartina 1. Prevalenza di FCP nelle 4 province esaminate.







Cartina 2. Distribuzione geografica della FCP nelle province di Verona, Mantova, Rovigo.



Legenda:    Cane affetto da FCP



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